1、莱昂纳多（演员 詹姆斯·阿诺德·泰勒），神龟们的头儿，头脑冷静，英勇果断，以武士刀为兵器。由于行事小心谨慎，把斯普林特老师的教导作为处事准则，常被其他几位神龟兄弟戏称为“斯普林特二世”，但是在紧要关头，往往是神龟们的行动领袖。
2、拉斐尔（演员 诺兰·诺斯），性格火爆，但正直善良，嫉恶如仇，兵器是忍者匕首。在战斗中英勇无畏、一往无前，但也会由于火爆的性格而行事鲁莽，在斯普林特老师的教导下，渐渐领悟了作为一名忍者的必要修为。无独有偶，拉斐尔还因此认识了与他一样性格火爆的凯西琼斯，成为并肩作战的好朋友。
3、米开朗琪罗（演员 米奇·凯利），神龟中最孩子气的一个，言行幽默，随和体贴，使用的兵器是双节棍。米基（米开朗基罗的昵称）的最爱是比萨饼，传说他会说人话后的第一句就是“比萨”！米基在平时常常和其他的神龟们拌嘴，但真正闹小矛盾的时候，往往能体贴退让。
4、多纳泰罗（演员 米切尔·威特菲尔德），性情随和，酷爱科学发明，精通电脑和机械制造，兵器是武士棒。神龟们在与邪恶势力作斗争的时候，往往能用上多纳泰罗发明的各种工具，并发挥出特殊的效果，拉斐尔的神龟摩托就是多纳泰罗的杰作。
5、斯普林特（演员 岩松信），原本是日本武术家，武艺高强、性格善良、个性忍隐谨慎，偶然沾染放射物质，变异成为了鼠人，后来收留了四只同样由于感染辐射而变异称为人形的乌龟，并将他们教导成为了正义的战士：忍者神龟。作为神龟的老师和领导，斯普林特都占有重要的地位。
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